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  • 均一化cDNA文库构建

    均一化cDNA文库是克服基因转录水平上巨大差异给文库的筛选和分析带来障碍的有效措施,有利于研究基因的表达和分析。现在,在构建均一化cDNA文库中至少有两种主要的观点。一种是基于复性动力学的原理,高丰度的cDNA在退火下复性速度快,而低丰度的cDNA复性要很长时间,从而可以通过控制复性时间来降低丰度;另一种是基于基因组DNA在拷贝数上具有相对均一化的性质,通过cDNA和DNA的饱和杂交而降低在文库中高拷贝存在的cDNA的丰度。我们主要通过第一种方法实现均一化,以达到降低基因间拷贝数差异,有助于低拷贝基因的筛选。

    • 产品详情

    均一化cDNA文库构建

        1. 服务流程

          1.1  RNA提取
          1.2  mRNA分离
          1.3  cDNA合成与均一化处理
          1.4  cDNA长度分级
          1.5  分级后的cDNA与目的载体的all-direct重组
          1.6  重组产物电转化
          1.7  均一化cDNA文库的鉴定
            a) 检测库容量(总CFU)
            b) 随机挑取32个克隆子,PCR方法检测平均插入片段大小。
            c) 抽提均一化cDNA文库的混合质粒(大抽),qPCR检测均一化前后两个文库总质粒中两个看家基因的表达量差异,以判断均一化的效果。

       2.送样要求

          2.1  针对每个文库,客户需提供200ug以上的RNA或2g以上的组织样本。

       3.发货内容

         3.1  我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),随机克隆子的PCR鉴定图谱,文库构建报告。

       4.质量标准

         4.1  文库库容量:大于1*10^5 CFU。
         4.2  平均插入片段:大于1.2Kbp。
         4.3  阳性率:大于95%。
         4.4  均一化后相对于均一化前看家基因拷贝数降低50倍以上。

       5.服务时间

        25个工作日内

    文库构建

    产品>  

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