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  • 全长cDNA文库构建

    我们提供高全长比例的文库构建服务,全长比例可以高达85%以上。

    • 产品详情

    一、普通全长cDNA文库构建

    1. 服务流程

    1.1  客户样品QC,Total RNA的提取。
    1.2  mRNA的分离。
    1.3  采用CAP Trapper法进行全长mRNA的富集。
    1.4  以mRNA为模板进行cDNA双链的合成。
    1.5  对合成的cDNA双链进行分级纯化。
    1.6  将分级纯化的cDNA与载体进行all-direct重组反应。
    1.7  将重组产物转化DH10B感受态细胞。
    1.8  cDNA文库的QC。
       a)  检测文库库容量。
       b) 每个文库随机挑取32个克隆子,PCR检测检测平均插入片段大小,阳性率。
       c)  随机挑取24个克隆进行正向测序,通过NCBI的BLSTAX分析全长率。

    2.送样要求

       2.1  针对每个文库,客户需提供至少能提取500ug总RNA的样本,或者至少500ug的总RNA。

    3.发货内容

       3.1  我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),随机克隆子的PCR鉴定图谱,24个克隆正向测序报告,文库构建报告。

    4.质量标准

       4.1  文库库容量:大于1*10^6 CFU。
       4.2  平均插入片段:大于1.2Kbp。
       4.3   阳性率:大于95%。
       4.4   全长率:大于65%。
       4.5   我们构建的文库相对于市场上的其他文库构建方法具有以下优势:
         1)我们从mRNA为模板直接进行cDNA双链的合成,没有经过任何扩增的过程,保证了文库的质量和忠实性。
         2)使用了目前市场上高质量的反转录酶(Superscrip III),保证文库的片段长度。
         3)使用重组的方法,不经过任何的酶切过程,不用担心cDNA被切断而影响文库质量,重组效率较酶切连接高很多,可以大大提高原始文库的库容量。

    5.服务时间

    25个工作日内
     
    二、高全长比例全长cDNA文库构建

    1. 服务流程

    1.1  客户样品QC,Total RNA的提取。
    1.2  mRNA的分离。
    1.3  使用特殊的抗体进行全长mRNA的富集。
    1.4  以mRNA为模板进行cDNA双链的合成。
    1.5  对合成的cDNA双链进行分级纯化。
    1.6  将分级纯化的cDNA与载体进行all-direct重组反应。
    1.7  将重组产物转化DH10B感受态细胞。
    1.8  cDNA文库的QC。
       a) 检测文库库容量。
       b) 每个文库随机挑取32个克隆子,PCR检测检测平均插入片段大小,阳性率。
       c) 随机挑取24个克隆进行正向测序,通过NCBI的BLSTAX分析全长率。

    2.送样要求

       2.1  针对每个文库,客户需提供至少能提取500ug总RNA的样本,或者至少500ug的总RNA。

    3.发货内容

       3.1  我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),随机克隆子的PCR鉴定图谱,24个克隆正向测序报告,文库构建报告。

    4.质量标准

       4.1  文库库容量:大于1*10^6 CFU。
       4.2  平均插入片段:大于1.2Kbp。
       4.3  阳性率:大于95%。
       4.4  全长率:大于85%。
       4.5  我们构建的文库相对于市场上的其他文库构建方法具有以下优势:
         1)我们从mRNA为模板直接进行cDNA双链的合成,没有经过任何扩增的过程,保证了文库的质量和忠实性。
         2)使用了目前市场上高质量的反转录酶(Superscrip III),保证文库的片段长度。
         3)使用重组的方法,不经过任何的酶切过程,不用担心cDNA被切断而影响文库质量,重组效率较酶切连接高很多,可以大大提高原始文库的库容量。

    5.服务时间

    35个工作日内

    文库构建

    产品>  

    本网站由阿里云提供云计算及安全服务
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